Sepax ProAqa Excel亲和色谱柱

Sepax ProAqa Excel亲和色谱柱

填料特性

空白对照

要使用高纯度的缓冲液，缓冲液使用前需要排气和过滤（0.22 μm）。进样前，请务必做空白对照，并仔细检查峰积分结果中是否存在噪音或基线绘制不正确。为了降低结合缓冲液和洗脱缓冲液转变时引起的基线波动，建议使用：
（a）50 mM磷酸盐（pH 7.0），0.15 M NaCl作为起始/冲洗溶液。
（b）100 mM磷酸钠，0.15 M NaCl（pH 2.5）或100 mM，0.15 M NaCl（pH 2.5）作为洗脱缓冲液。
这些是对信号噪音有效的洗涤/洗脱液。盐酸（HCl）能使抗体变性，所以洗脱产品如果需要生物活性的话，不建议添加HCl。

起始/冲洗溶液

（a）大多数情况下，可以使用简单的缓冲液，例如10-100 mM的磷酸盐或Tris。
（b）结合/洗脱缓冲液的pH范围为6.0-7.5，但是请注意，在较高的pH范围下结合力强。
（c）添加一些盐（0.1-0.2 M NaCl或KCl）抑制蛋白间相互作用的非特异性吸附。

洗脱条件

对于分析应用，使用25-100 mM磷酸盐（pH 2.0-3.5），含或不含高达150 mM的NaCl。可以使用的其他洗脱缓冲液成分包括磷酸钠、盐酸、、柠檬酸盐、醋酸盐以及其他含低pH成分的缓冲液。
由于抗体的结合/洗脱行为因种类和亚类而异，因此应凭经验确定洗脱条件。

样品准备和上样

为了保证高效结合和避免柱子滤片堵塞，样品一般按以下方式准备：
（a）溶解或交换样品到起始/洗涤缓冲液，这对于大份样品（大于25%柱体积）尤其重要。
（b）进样前离心或用0.22 μm滤膜过滤样品。
（c）热处理血清样品（56℃加热30 min）去除残留的纤维蛋白原，它们会在多次运行中阻塞色谱柱。
（d）尽可能对样品脱脂，因为脂质会引起不可逆的结垢。

为保证高效结合及避免填料和色谱柱污染，需要确认上样量：
（a） 图2和图3显示了ProAqa Excel色谱柱的动态测试范围。
（b） 其他抗体的结合能力取决于抗体来源和亚类。
（c） 需要优化结合和洗脱条件并用样品确认，以确保达到结合平衡和洗脱。
（d） 在分析应用中，Z小和Z大载量应该通过标准曲线的线性确定（如图2所示，对于样品浓度在0.029-7.500 mg/mL的常用定量分析，可以将检测波长设置为280 nm。如图3所示，如果样品浓度较高（高达40 mg/mL），波长可设置为300 nm。在该分析应用中，建议使用双波长检测（280 nm和300 nm）。

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