Fluo-5N AM,Cell Permeant，使用方法

技术参数

其他名称：Fluo-5N, Acetoxymethyl Ester

分子式：C50H47F2N3O25

分子量：1127.92

解离常数：~90µM

纯度：≥95%

储存条件：-20℃避光干燥

化学结构式：

相关描述

Fluo-5N AM,Cell Permeant，钙离子荧光探针是Fluo-4的结构类似物，具有较低的钙结合亲和力，可用于钙水平在1µM~1mM区间内的胞内钙离子检测，而Fluo-3和Fluo-4在这个区间内的钙离子反应达到饱和。

Fluo-5N AM,Cell Permeant，钙离子荧光探针，激发和发射波长分别是494和516nm。

使用方法

A， 试剂准备

1） 配制Pluronic F-127母液：称取100mgPluronic F-127粉末中加入500μl DMSO，配制成20% DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。

溶液室温保存，不用冷藏。如有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

2）HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.2)或者其他生理缓冲液 。

B， 操作步骤

1） 用无水DMSO溶解Fluo-5NAM配制成2-5mM的储存液，或将已配好的Fluo-5NAM储存液取出于室温回温。

（如：若配制成4mM的母液，需向50µg Fluo-5NA M中加入11µl无水DMSO）。

准备Fluo-5NAM工作液之前，有时需要往Fluo-5NAM储存液中加入20% Pluronic F-127溶液，增强AM探针的水溶性。

2） 用HHBS或其他生理缓冲液（含钙镁）将Fluo-5NAM+DMSO储存液稀释到1-20µM的工作液。

3） 如果细胞内含有机阴离子转运体，磺吡酮（Sulfinpyrazone）可能需要加入细胞培养基内，以降低去酯化探针的泄露水平。

4） 将准备好的Fluo-5NAM染色工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育20-120min。

5） 吸掉染色工作液，并用HHBS或其他生理缓冲液清洗细胞1~2次，以去除残留探针。

6） 室温再孵育30min以保证细胞内AM的去酯化。

7） 可用激发/发射波长来检测荧光。

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