TZXD-0435-人Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒

　　以下是关于‌人Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒实验方案‌的详细操作指南：

　　TZXD-0435  人Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒

　　一、实验原理‌

　　双抗体夹心法‌：包被抗体与样本中ColⅣ结合后，加入酶标抗体形成复合物，通过TMB显色定量。

　　竞争法‌(部分试剂盒)：样本中ColⅣ与sws标记抗原竞争结合抗体，显色强度与浓度负相关。

　　二、试剂准备‌

　　平衡温度‌：所有试剂使用前需室温平衡30分钟。

　　洗涤液配制‌：25倍浓缩液需用蒸馏水稀释至500mL工作液。

　　标准品稀释‌：冻干粉用稀释液复溶后，按梯度稀释(如24μg/L→12μg/L→6μg/L等)。

　　三、样本处理‌

　　血清/血浆‌：

　　采集后需3000×g离心10分钟(血清)或30分钟(血浆)分离上清。

　　避免使用含NaN3或肝素抗凝剂。

　　组织匀浆‌：生理盐水匀浆后3000×g离心10分钟取上清。

　　保存条件‌：分装冻存于-20℃，避免反复冻融。

　　四、操作步骤‌

　　加样‌：

　　空白孔不加样，标准孔加梯度标准品，样本孔先加稀释液40μl再补加样本10μl(5倍稀释)。

　　温育‌：37℃孵育30分钟，洗涤3次。

　　显色‌：

　　加入TMB底物避光显色15分钟，终止液终止反应。

　　检测‌：酶标仪450nm测OD值，绘制标准曲线计算浓度。

　　五、注意事项‌

　　避免污染‌：使用一次性吸头，不同批号试剂勿混用。

　　板条保存‌：未用板条需密封防潮，-20℃保存。

　　显色控制‌：底物B避光，显色后立即检测。

　　六、技术参数‌

　　检测范围‌：0.313-50ng/mL(不同品牌有差异)。

　　灵敏度‌：可达0.113ng/mL。

　　如需具体品牌操作差异或问题排查，可进一步说明需求。

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