活化 Rho Pull-Down 和检测试剂盒

Thermo Scientific Pierce 活性 Rho 沉降和检测试剂盒能够通过与 Rhotekin 蛋白结合结构域的特异性蛋白相互作用选择性地富集和检测 GTP 结合 Rho GTPase。

活性 Rho 沉降和检测试剂盒包括纯化的 GST-Rhotekin Rho 结合结构域 (RBD)、琼脂糖树脂、阳性和阴性对照品（分别为 GTPγS 和 GDP）、裂解/结合/洗涤缓冲液、抗 Rho 抗体、二抗、样品缓冲液、离心柱和收集管。该试剂盒使用 NIH 3T3 细胞的裂解物进行验证，已知该细胞系具有稳健的 Rho 活性。

活化 Rho 沉降和检测试剂盒的特点：

•高灵敏度和精确度—优化试剂、特异性泛抗 Rho 抗体和 Western 印迹程序可确保精确控制和半定量结果
•经验证—对 Rho 检测进行功能检测，以确保质量和性能
•兼容—对小鼠、大鼠和人来源的多种细胞类型有效

应用：
• 追踪细胞分化、迁移、分裂和细胞骨架重排期间的 Rho GTPase 活化
• 研究应激纤维形成期间 Rho 的活化
• 监测使用生长因子刺激后的 Rho 活性
• 筛查小分子抑制剂对 Rho 活性的影响

使用经用于活化内源性 Rho 的 GTPγS 处理的细胞裂解物相对于经灭活小 GTPase 的 GDP 处理的裂解物，验证了活化 Rho 沉降和检测试剂盒的活化 Rho 的功能和特异性。GTPγS 处理捕获 GTP 结合活化形式的 Rho，在存在内源性 Rho 时产生强烈信号。GDP 处理使 Rho 进入 GDP 结合状态（非活化），无论 Rho 蛋白水平如何均几乎不产生信号。该试剂盒针对使用 HRP 偶联的二抗（包括）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化学发光底物（单独提供，产品编号 34080）进行的 Western 印迹检测进行了优化。试剂盒均包含足够用于 30 次沉降实验的组成部分。

试剂盒组成部分也可用于免疫荧光染色。使用试剂盒中提供的 GST-RBD 蛋白和抗 Rho 抗体，通过 NGF 刺激神经元 NS-1 细胞以研究活性 Rho 的空间分布。

Rho 背景：
Rho 系列 GTPase 可服务于许多细胞功能，包括细胞信号转导、转录调节以及肌动蛋白细胞骨架的组织。该 GTPase 家族包括 Rho（RhoA、RhoB 和 RhoC）、Rac（Rac1、Rac2、Rac3 和 RhoG）、Cdc42（Cdc42 和 G25K）、Rnd（Rnd1、Rnd2 和 RhoE/Rnd3）、RhoBTB 家族和 Miro 家族。这些 GTPase 通过 GPCR、激酶、细胞因子和黏附受体实现从质膜到细胞溶质的信号转导。通过蛋白羧基末端的香叶酰香叶酰脂质修饰来实现与质膜的黏附。通过 Rho GTPase 的信号转导导致应力纤维中肌动蛋白重组并形成局灶性粘连。RhoA 定位于细胞溶质和质膜，而 Rho B 定位于质膜和膜囊泡。与 RhoA 类似，RhoC 为细胞溶质，但它定位于核周区域。

Rho GTPase 与 GEF、GAP、GDI 和效应蛋白相互作用进行信号转导。Rho GTPase 有 30 多种哺乳动物 GEF，每个 GEF 含一个用于核苷酸交换反应的 DBl 同源结构域、一个普列克底物蛋白同源结构域和用于蛋白-蛋白相互作用的额外特异性结构域。Rho Gap 蛋白促进 GTP 水解，GDI 蛋白使细胞质和膜之间的 Rho GTPase 转位，并抑制 Rho GEF 的 GDP/GTP 交换。GEF 和 GDI 与 Rho 和 Gα 亚单元的相互作用是通过 GPCR 进行信号转导所必需的。其中一些效应蛋白包括 p160 Rho 激酶（一种参与应激纤维形成的/激酶）、p140mDia（可触发肌动蛋白细胞骨架的重组）和 Rhotekin（一种介导信号转导以激活 NF-κB 的/激酶支架蛋白）。Rho 家族 GTPase 可在细胞信号转导期间发挥激动作用以及在分化期间发挥拮抗作用。

更多产品数据
•通过特异性下游效应子测定小 GTPase 的激活
•在神经元细胞分化过程中检测和定位活性 GTPase