活化 Arf1 Pull-Down 和检测试剂盒

Thermo Scientific Pierce 活化 Arf1 沉降和检测试剂盒是一种全套试剂盒，能够通过与 GGA3 蛋白结合结构域的特异性蛋白相互作用选择性地富集和检测 GTP 结合 Arf1 GTPase。

活化 Arf1 沉降和检测试剂盒包含纯化的 GST-GGA3 结合结构域 (PBD)、琼脂糖树脂、阳性和阴性对照品（分别为 GTPγS 和 GDP）、裂解/结合/洗涤缓冲液、抗 Arf1 一抗、样品缓冲液、离心柱和收集管。该试剂盒使用 MDCK 细胞的裂解物进行验证，已知该细胞系具有稳健的 Arf1 活性。

活化 Arf1 沉降和检测试剂盒的特点：

•高灵敏度和精确度—优化试剂、特异性抗 Arf1 抗体和 Western 印迹程序可确保精确控制和半定量结果
•经验证—对 Arf1 检测进行功能检测，以确保质量和性能
•兼容—对小鼠、大鼠和人来源的多种细胞类型有效

应用：
• 追踪细胞分化、迁移、分裂和细胞骨架重排期间的 Arf1 GTPase 活化
• 研究外壳蛋白组装至出芽囊泡或反式高尔基体网络和内体期间 Arf1 的活化
• 监测使用生长因子刺激后的 Arf1 活性
• 监测小分子抑制剂处理后的 Arf1 活性

使用经用于活化内源性 Arf1 的 GTPγS 处理的细胞裂解物相对于经灭活小 GTPase 的 GDP 处理的裂解物，验证了活化 Arf1 沉降和检测试剂盒的活化 Arf1 富集方法的功能和特异性。GTPγS 处理捕获 GTP 结合活化形式的 Arf1，在存在内源性 Arf1 时产生强烈信号。GDP 处理使 Arf1 进入 GDP 结合状态（非活化），无论 Arf1 蛋白水平如何均几乎不产生信号。对试剂盒进行了优化，用于使用 HRP 结合型二抗（山羊抗兔 IgG，产品编号 31460）和 Thermo Scientific SuperSignal West Pico 化学发光底物（产品编号 34080）进行 Western 印迹检测。试剂盒所含成分均足够进行 30 次沉降实验。

Arf1 背景：
ADP 核糖基化因子蛋白 1-6 (Arf) 是 Ras 小 GTPase 家族的成员。虽然在结构上相似，但 Arf1-6 的细胞作用不同于其他 Arf 家族成员；其内源性作用不是 ADP 核糖基化，而是调节异源三聚体 G 蛋白。Arf 蛋白可分为三类：I 类 — Arf 1-3；II 类 — Arf 4,5；III 类 — Arf6。I 类和 II 类 Arf 与反式高尔基体网络 (TGN) 相关，参与将效应蛋白募集至高尔基体膜并形成囊泡。与其他 GTPase 不同，Arf GTPase 在氨基末端通过豆蔻酰化修饰以便插入膜中。III 类蛋白 Arf6 与质膜相关，参与质膜处的囊泡形成、囊泡再循环和肌动蛋白细胞骨架的重构。

尽管 Arf GTPase 在所有细胞中均有表达，但 Arf1 是极丰富、极活跃和进行表征的。Arf1 将其效应子（包括外被体和网格蛋白适配体复合物 (AP)）募集至高尔基体，发生囊泡形成和出芽。募集后，Arf1 维持膜上的外壳蛋白，直至形成囊泡。然后，Arf1 与其效应子相互作用，使得 Arf1 从膜中释放和囊泡出芽。高尔基体局部含 γ耳 Arf (GGA) 效应子结合蛋白包含氨基端 VHS 结构域、GGA 同源结构域 (GGAH)、富含的连接区和羧基-末端 γ-耳衔接蛋白同源结构域 (AGEH)。VHS 结构域与细胞质结构域相互作用（进行受体分选）、GGAH 与活化 Arf 结合、富含的区域与网格蛋白相互作用以及 AGEH 结构域与细胞溶质蛋白相互作用。通过突变研究，已证明 GGAH 结构域足以结合 GTP 结合型 Arf，并且 Arf1 可结合所有三种 GGA 效应蛋白。GGA 蛋白与 TGN 和质膜的关联受 Arf 调节。

更多产品数据
•通过特异性下游效应子测定小 GTPase 的激活